Kit ELISA E.coli (K-12 et lyse alcaline) HCP

Différent de la technique de désintégration physique traditionnelle, les HCP dans les échantillons d'ADNp sont exposés à des solutions hautement alcalines et dénaturés pendant le processus d'extraction, conduisant à une grande différence dans les résultats de détection mesurés par les immuno-dosages. Ce kit est basé sur le test d'immunosorbant lié à une enzyme en phase solide (ELISA) avec une technique en sandwich à double anticorps pour détecter les protéines résiduelles des cellules hôtes (HCP) des souches K-12 d'E. coli. Un anticorps polyclonal de mouton spécifique aux HCP d'E. coli (souches K-12) préparés par lyse alcaline a été utilisé dans le test pour capturer tous les HCP restants dans l'échantillon. La couverture des anticorps est évaluée par la méthode courante actuelle. Les étalons d'étalonnage et les échantillons d'essai ont été simultanément ajoutés à la plaque de microtitrage revêtus de l'anticorps de capture purifié d'affinité et suivis d'une incubation et d'un lavage. L'anticorps biotinylé a été ajouté à la plaque de microtiter pour lier les HCP, puis a réagi avec la streptavidine marquée avec HRP (Horseradish Peroxydase). Le substrat de TMB (3,3 ',5,5'-tétraméthylbenzidine) a été ajouté en réaction, HRP a catalysé l'oxydation du TMB parH₂O₂Pour produire un produit bleu (pic d'absorption maximal à 655 nm). Ensuite, la solution d'arrêt a été ajoutée pour mettre fin à la réaction enzymatique, ce qui a donné un produit de couleur jaune (pic d'absorption maximal à 450 nm). Les valeurs d'absorbance à la longueur d'onde de 450 nm étaient positivement corrélées à la concentration de HCP dans l'étalon d'étalonnage et l'échantillon. La concentration de HCP dans l'échantillon peut être calculée en utilisant la courbe dose-réponse.