Ce kit convient à la trypsine porcine quantitative dans les processus de purification en aval de produits biologiques, capable d'identifier la trypsine porcine recombinante et la trypsine dérivées du pancréas porcin recombinant couramment disponibles.
La trypsine porcine, une sérine protéase, clive spécifiquement les liaisons peptidiques au niveau de la C-terminale de la lysine et de l'arginine. Il est principalement utilisé dans la production d'insuline recombinante, l'activation des particules virales et le traitement cellulaire dans les processus de fabrication de vaccins.
Ce kit est basé sur le test immunosorbant enzymatique en phase solide (ELISA) avec une technique en sandwich à double anticorps pour détecter la trypsine résiduelle dans les échantillons. Un anticorps polyclonal de mouton spécifique à la trypsine a été utilisé dans le test pour capturer toute trypsine restante dans les échantillons. Des normes d'étalonnage et des échantillons d'essai ont été ajoutés à la plaque de microtitrage pré-revêtue d'anticorps de capture. Après lavage des protéines non liées, l'anticorps de détection et l'anticorps anti-trypsine conjugués à la biotine ont été ajoutés dans le puits pour former le complexe. Après incubation et lavage, la streptavidine conjuguée à la peroxydase de raifort (Streptavidine-HRP) est ajoutée. Après une autre étape d'incubation et de lavage, le substrat de TMB (3,3 ',5,5'-tétraméthylbenzidine) a été ajouté dans la réaction, HRP a catalysé l'oxydation du TMB par H2O2Pour produire un produit bleu (pic d'absorption maximal à 655 nm). Ensuite, la solution d'arrêt a été ajoutée pour mettre fin à la réaction enzymatique, ce qui a donné un produit de couleur jaune (pic d'absorption maximal à 450 nm). Les valeurs d'absorbance à la longueur d'onde de 450 nm étaient positivement corrélées à la concentration de trypsine dans les étalons d'étalonnage et les échantillons. La concentration de Trypsine dans les échantillons peut être calculée en utilisant une courbe dose-réponse.
| Composants | Condition d'expédition | Taille de l'unité | Méthode de détection |
| Norme d'étalonnage de la trypsine | 2-8 ℃ | 96 Essais | Sandwich ELISA |
| Bandes de microtitration anti-trypsine | |||
| Solution de reconstitution | |||
| Concentré tampon de lavage (10 ×) | |||
| Anti-Trypsine: Biotine (100 ×) | |||
| Streptavidin-HRP (100 ×) | |||
| Substrat TMB | |||
| Solution d'arrêt | |||
| Film d'étanchéité |
| Linéarité et gamme | 0.04-2.56 ng/mL, R2> 0.990 |
| Précision | Taux de récupération = 85.7%-111.0% |
| LLOQ | 0.04 ng/mL |
| ULOQ | 2.56 ng/mL |
| Limite de détection | 0.0144 ng/mL |
| Répétabilité | 4.1%-7.7% (CV≤ 20%) |
| Spécificité | Pas de réactivité croisée avec des analogues couramment protéiques (e.g., ovalbumine et BSA de deux fabricants différents, respectivement), des lignées cellulaires d'ingénierie courantes et des protéines de bactéries d'ingénierie (e.g., MDCK, CHO, Vero, 293T, E.coli, et P.pastoris) |
| Robustesse | Incuber à 25 ℃ ± 5 ℃, CV≤ 20% |
| Aptitude aux instruments non limitée à Thermo Multiskan FC, Bio-Tek Synergy2 |
SHENTEK®Kit de préparation d'échantillons d'ADN de cellules hôtes résiduelles
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