Ce kit est destiné à déterminer la présence de Trypsine-analogue dans les processus de préparation de produits biologiques, capable d'identifier des enzymes résiduelles telles que TrypLE™De Thermo Fisher Scientific, trypsine recombinante de Sartorius et HyrTryp™De Cytiva.
La trypsine-analogue est une enzyme fongique recombinante de haute pureté d'origine non animale obtenue à partir de la production de fermentation de Fusarium oxysporum DSM2672. L'analogue de trypsine clive les peptides du côté C-terminal des résidus de lysine et d'arginine comme le font les solutions standard de trypsine, qui peuvent être utilisées pour dissocier une variété de cellules adhérentes, y compris, mais sans s'y limiter, les HEK293, A549, les kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK) et les cellules souches embryonnaires (ESC).
Ce kit est basé sur le test immunosorbant enzymatique en phase solide (ELISA) avec une technique en sandwich à double anticorps pour détecter la trypsine-analogue résiduelle dans les échantillons. Un anticorps polyclonal de mouton spécifique de la Trypsine-analogue a été utilisé dans le test pour capturer tout analogue de trypsine restant dans les échantillons. La norme d'étalonnage (ou échantillon d'essai) et l'anticorps anti-trypsine-analogue marqué HRP (raifort peroxydase) ont été simultanément ajoutés à la plaque de microtiter, qui revêtu de l'anticorps de capture purifié d'affinité et suivi d'une incubation et d'un lavage. Ensuite, le substrat de TMB (3,3 ',5,5'-tétraméthylbenzidine) a été ajouté en réaction, HRP a catalysé l'oxydation du TMB par H2O2Pour produire un produit bleu (pic d'absorption maximal à 655 nm). Ensuite, la solution d'arrêt a été ajoutée pour mettre fin à la réaction enzymatique, ce qui a donné un produit de couleur jaune (pic d'absorption maximal à 450 nm). Les valeurs d'absorbance à la longueur d'onde de 450 nm étaient positivement corrélées à la concentration de l'analogue de trypsine dans la norme d'étalonnage et les échantillons. La concentration de Trypsine-analogue dans les échantillons peut être calculée en utilisant la courbe dose-réponse.
| Composants | Condition d'expédition | Taille de l'unité | Méthode de détection |
| Trypsine-norme d'étalonnage analogique | 2-8 ℃ | 96 Essais | Sandwich ELISA |
| Bandes de microtitrage anti-trypsine analogique | |||
| Diluant | |||
| Concentré tampon de lavage (10 ×) | |||
| Anti-trypsine-analogique: HRP (100 ×) | |||
| Substrat TMB | |||
| Solution d'arrêt | |||
| Film d'étanchéité |
| Linéarité et gamme | 0.16-10.24 ng/mL, R2> 0.990 |
| Précision | Taux de récupération = 94.0%-99.1% |
| LLOQ | 0.16 ng/mL |
| ULOQ | 10.24 ng/mL |
| Limite de détection | 0.0319 ng/mL |
| Répétabilité | 3.6%-4.4% (CV≤ 20%) |
| Spécificité | Pas de réactivité croisée avec des analogues couramment protéiques (e.g., trypsine humaine recombinante, trypsine bovine recombinante et trypsine porcine recombinante) et lignées cellulaires d'ingénierie courantes (e.g., MDCK, CHO, Vero, HEK293, E.coli, P.pastoris et cellules Sf9) |
| Robustesse | Incuber à 25 ℃ ± 5 ℃, CV≤ 20% |
| Aptitude aux instruments non limitée à Thermo Multiskan FC, Bio-Tek Synergy2 |
SHENTEK®Kit de préparation d'échantillons d'ADN de cellules hôtes résiduelles
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