Principales méthodes de test RCR

Qu'est-ce que les tests RCR?

Le test RCR fait référence à une série de méthodes utilisées lors de la préparation de produits de thérapie cellulaire CAR-T pour détecter la présence de réplication Rétrovirus compétent (RCR) ou de Lentivirus compétent de réplication (RCL). Comme ces virus compétents en réplication (RCV) peuvent survenir par des mutations réverbérantes de vecteurs viraux et posséder des capacités de réplication, ils présentent potentiellement un risque de sécurité pour les patients. Le but deEssais RCREst d'assurer la sécurité de CAR-T produits et d'empêcher la contamination RCV.

Principales méthodes de test RCR

Indicateur Méthode de culture cellulaire

Cette méthode consiste à co-cultiver l'échantillon avec des cellules indicatrices et à observer les effets cytopathiques (CPE) ou les signes de réplication virale. Cette méthode peut détecter visuellement la présence de RCR mais prend du temps.

Méthode ELISA (dosage de protéines p24)

Cette méthode détermine la présence de contamination RCR en détectant la présence de la protéine centrale virale p24. La protéine p24 est une protéine centrale des rétrovirus et des lentivirus, et sa présence indique généralement la présence de particules virales.

Méthode PCR/qPCR

Cette méthode utilise des amorces spécifiques pour amplifier des régions spécifiques du génome viral (telles que les gènes psi-gag ou VSV-G) en utilisant la réaction en chaîne par polymérase (PCR) ou la PCR quantitative (qPCR) technologie pour détecter la présence de RCR. En raison de son temps de détection court, de sa sensibilité élevée et de sa forte reproductibilité, la méthode qPCR est largement utilisée pour les tests de libération rapide de CAR-T produits.

Test d'activité de la transcriptase inverse (PERT)

Cette méthode détermine la présence de RCR en détectant l'activité de la transcriptase inverse. La transcriptase inverse est une enzyme essentielle à la réplication des rétrovirus et des lentivirus, et son activité peut servir de marqueur pour la réplication virale.

Parmi ces méthodes, la méthode qPCR est préférée par de nombreuses sociétés d'applications CAR-T en raison de son efficacité et de sa sensibilité. Avec la méthode qPCR, les résultats des tests RCR peuvent être obtenus en un temps relativement court, garantissant la sécurité et la qualité de CAR-T produits.

En général, les tests RCR sont un élément indispensable du processus de production des produits de thérapie cellulaire CAR-T, visant à garantir que le produit ne contient pas de virus compétents en matière de réplication, réduisant ainsi le risque de tumeurs secondaires et d'autres problèmes de sécurité potentiels pour les patients recevant le traitement.