Détection d'agents adventifs dans les produits biologiques

Les contaminants des agents adventifs dans les stocks de semences, les substrats cellulaires et les matières premières utilisées dans la production de produits biologiques comprennent les bactéries, les champignons, les mycoplasmes, les mycobactéries et les virus. L'élimination ou le contrôle efficace de ces agents est obtenu grâce à des techniques non spécifiques et spécifiques.

• Les méthodes non spécifiques offrent généralement une large gamme de détection, mais présentent parfois des limites de sensibilité et des problèmes potentiels de détection liés à l'hôte, tels que les tests sur les animaux et la culture.

• Des méthodes spécifiques ciblent des agents pathogènes spécifiques, tels que la PCR pour les séquences génétiques. Alors que la PCR a une sensibilité élevée, sa limitation est l'incapacité de concevoir des amorces pour des séquences inconnues.

Pour garantir une biosécurité maximale, il est essentiel de suivre une approche globale qui comprend un approvisionnement approprié et un contrôle de la qualité des matières premières et de départ, le respect des bonnes pratiques de fabrication (BPF) principes (y compris la surveillance environnementale et du personnel et la validation des processus) et des tests rigoureux pour la vérification. Les méthodes ci-dessous sont généralement utilisées pour la détection des agents adventifs:

1. tests in vivo:

1) Utilisation d'œufs de poule ou d'animaux embryonnés pour les tests.

2. Tests in vitro:

1) Méthode de culture:

• En utilisant différents médias ou agar.

2) Méthodes de PCR:

• Pour la détection virale spécifique à l'espèce.

3) Méthodes biochimiques:

• Des dosages comme le PERT pour la transcriptase inverse.

4) Séquençage des gènes:

• Pour les séquences de gènes viraux ou bactériens non spécifiques.

5) Essais d'infection:

• Dassages de cellules indicatrices pour différents types de virus compétents en réplication.

6) Microscopie électronique de transmission (TEM):

• Pour l'observation morphologique.

Les méthodes de détection des agents adventifs varient en fonction de l'étape de biotraitement, du type d'échantillon et du micro-organisme cible. L'utilisation d'instruments et de réactifs appropriés assure une détection fiable et sensible, même à de faibles niveaux de contamination. Il n'existe pas de méthode universelle pour la détection des agents adventifs, mais la sélection des bonnes techniques dans la liste ci-dessous peut vous aider à trouver les méthodes les plus adaptées à vos besoins.

1. Détection génomique:

• Utilisation du séquençage à haut débit pour séquencer de manière exhaustive l'ADN dans les produits biologiques et le comparer à des bases de données pour identifier les agents pathogènes potentiels ou d'autres ADN exogènes.

2. Détection protéomique:

• Utilisation de la spectrométrie de masse pour analyser les protéines des produits biologiques et identifier les protéines exogènes potentielles.

3. Détection immunologique:

• Utiliser des tests d'anticorps ou de réponse immunitaire pour détecter des composants spécifiques dans des produits biologiques, identifier les bactéries exogènes potentielles, les virus ou d'autres substances nocives.

4. détection de microbiologie:

• Utilisation de méthodes de culture pour isoler et identifier les micro-organismes et détecter les agents pathogènes potentiels.

5. détection moléculaire:

• Utilisation de la PCR pour détecter les ADN dans les produits biologiques et identifier les micro-organismes exogènes cibles.

La méthode basée sur la PCR est la technique moléculaire la plus courante pour la détection ou la quantification sensible et rapide de la contamination microbienne. En ciblant des séquences d'ADN spécifiques, il permet la détection de certaines espèces spécifiques, difficiles à cultiver in vitro ou nécessitant une longue période de culture, par exemple, la détection des espèces de mycoplasmes par qPCR est essentielle pour les tests de QC rapides à l'appui de la fabrication de la thérapie cellulaire et génique.

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