Identification et quantification des protéines des cellules hôtes résiduelles

Les protéines recombinantes sont principalement exprimées dans les cellules hôtes, telles que les bactéries, les levures, les mammifères, les insectes ou les lignées cellulaires végétales. Au cours du processus de bioproduction, ces cellules hôtes produisent également des protéines sous-produits nécessaires aux fonctions cellulaires normales. Lorsque les cellules subissent l'apoptose, la mort et la lyse, ces protéines sous-produits sont libérées dans le milieu de culture cellulaire. Par conséquent,Protéine de cellule hôte résiduelleDeviennent des impuretés critiques liées au processus qui peuvent avoir un impact sur la sécurité et l'efficacité cliniques. La pharmacopée américaine stipule que les niveaux de résidus HCP doivent être compris entre 1 et 100 ng/mg.

Les tests ELISA sont la méthode pharmacopée pour la quantification HCP, malgré certaines limites. Par exemple, la couverture d'anticorps dans les kits ELISA est seulement d'environ 50% à 80%, ce qui signifie qu'il ne peut pas couvrir tous les types de HCP. De plus, ELISA ne peut mesurer que la quantité totale de HCP et ne peut pas fournir d'informations sur les types et les quantités de HCP individuels. Par conséquent, les experts de l'industrie recommandent d'utiliser la spectrométrie de masse pour une identification précise et une analyse quantitative des HCP comme méthode orthogonale.

Application de spectrométrie de masse dans l'analyse résiduelle des protéines de cellules hôtes

1. Optimisation des bioprocédés

Des études comparatives d'échantillons en cours de processus provenant de différentes voies sont menées pour analyser l'efficacité par étapes de l'élimination de HCP, identifiant ainsi la voie optimale. Étant donné que l'ELISA ne peut détecter que la teneur totale en HCP, certains HCP à haute teneur mais à faible immunogénicité (non reconnue par les anticorps) ne peuvent pas être surveillés efficacement. Par conséquent, il est recommandé d'utiliser les données de spectrométrie de masse pendant le développement du processus pour une surveillance plus précise.

2. Analyse HCP dans les produits finaux

Une analyse comparative des substances médicamenteuses de différents lots est menée pour évaluer la stabilité du biotraitement. Cette analyse, combinée aux données ELISA, évalue davantage les impuretés HCP résiduelles et réduit les risques cliniques.